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動物染色體標本的實驗方法步驟
動物染色體標本的實驗方法步驟。染色體是細胞內遺傳物質的載體。骨髓細胞具有豐富的細胞質和高度的分裂能力,可直接觀察到細胞周期中的各個時相。但通常情況下,?中期染色體在鏡下的數量較少,如經秋水仙素處理后,分裂的骨髓細胞大多被阻斷在有絲分裂中期,再經離心、低滲、固定、滴片等步驟,便可得到理想的染色體標本,用以觀察中期染色體形態和染色體組型分析等實驗。
1. 前處理 實驗前3-4 小時,按每克體重3ug 劑量給蟾蜍的腹腔注射秋水仙素;
2. 取材 打開蟾蜍腹腔,截取1-2cm 長的一段小腸(以十二直腸為好),用見到剖開成片狀,在生理鹽水中洗凈;
3. 低滲 將洗凈的小腸投入到盛有5mL 低滲液的小試管中,在37℃水浴下處理30 分鐘以上;
4. 固定 棄去低滲液,加入新配制的甲醇(3):冰乙酸(1)固定液約5ml,靜止固定40分鐘左右;
5. 解離 棄去固定液,加入約2ml60%的冰乙酸,輕輕搖動,使解離的細胞充分散開,5 分鐘后棄去小腸,即得細胞懸浮液;
6. 滴片 吸取少許細胞懸浮液,在適當的高度滴3-4 滴于冰冷的載片上,迅速吹斜氣;
7. 干燥 滴片自然風干或吹風機吹干;
8. 染色 在載片上滴十滴磷酸緩沖液,再滴一滴Giemsa 染液,橡皮球輕輕吹均勻,染色30 分鐘左右;
9. 觀察 吹干后在顯微鏡下觀察。
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