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切片時常見問題及常用解決方法如下:切片橫向褶皺過多,原因:蠟塊溫度過高;切片刀變鈍;切片刀邊緣粘有少量石蠟.解決方法:將蠟塊重新放置冰袋或冷凍盒上,使蠟塊降溫;更換切片刀的位置,或換新的刀;或用水沾濕紗布,順刀刀口方向,輕輕擦拭切片刀。
不定的數道小裂縫或裂紋.原因:蠟塊溫度過高;刀變鈍.解決方法:將蠟塊重新放置冰袋或冷凍盒上,使蠟塊降溫;更換刀的位置,或更換新的刀.切出的蠟條明顯向一側彎曲變形.原因:彎曲處蠟塊質地不均,蠟塊未修整好,邊緣毛糙等;彎曲處刀變鈍.解決方法:重新修整蠟塊;移動刀;冷凍蠟塊,蠟塊質地稍變硬后也可以使彎曲變小.厚薄不均,或是每固定幾片后,切出一張完整的片子.原因:蠟塊過硬或過大;蠟塊夾持器或刀松動;切片機微動失靈,不能調節出正確的切片厚度.解決方法:組織塊過硬可重新取材包埋,過大可重新包埋;調整機器,上緊刀片;修理機器.
漂片溫度選擇比蠟塊熔點低10℃即可.溫度過高會使蠟條產生數目不等的小氣泡.
烤片時溫度與時間的選擇范圍廣,可從37℃烤箱烤干1天至75℃烤箱烤干20min,可以根據不同目的需要,確定烤片時間和溫度,或是依石蠟熔點來確定,一般將溫度控制比石蠟熔點高10~15℃.
組織脫蠟透明等過程采用物質分子相似相溶原理,試劑有效成分容易減少,所以脫蠟試劑要及時更換,若脫蠟不充分,會使切片染色不均勻;因乙醇、二甲苯等易揮發,故在操作完成時,應及時封蓋,溶液濃度降低會影響洗片效果。
染色時,鹽酸乙醇分化步驟尤其重要,分化的目的是使胞核染色,而無背景色.明礬蘇木精性質使其在酸性溶液中呈現紅色,在堿性溶液中呈現藍色.在鹽酸乙醇分化時,由深藍變為粉紅色時,應停止分化.分化時,有經驗者可以肉眼觀察至粉紅色時終止分化,初學者可鏡下多次觀察,至除胞核外,無其他背景著色時,停止分化。
或是依據鹽酸乙醇濃度,確定分化時間,試劑初配制時,鹽酸乙醇濃度高,分化時間短,反之則分化時間延長.分化完成后,將切片移至弱堿性的溶液中返藍,一般采用自來水,或是溫度在50℃的自來水中,因其本身為弱堿性,且取用方便,所以被廣泛使用.
切片機廠家的小編建議大家需吹干或烤干切片上水分,否則鏡下觀察時有一層白霧,導致細胞輪廓不清楚;病理組織切片HE染色一般采用中性樹膠封片,封片時以無氣泡為準,否則會影響鏡下觀察;常用24mm×32mm大小的蓋玻片,只需用一次性的巴氏吸管滴2滴中性樹膠即可,過少則致封片不完全,過多則致中性樹膠外溢.
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